Подготвителна фаза: В този начален етап, 6-въглеродна захарна молекула (обикновено глюкоза) се фосфорилира два пъти, за да образува фруктозо-1,6-бифосфат. Този процес изисква въвеждането на 2 ATP молекули и използва ензимите хексокиназа и фосфофруктокиназа.
Фаза на разцепване: По време на този етап фруктозо-1,6-бисфосфатът се разцепва на две 3-въглеродни захари:глицералдехид-3-фосфат (GAP) и дихидроксиацетон фосфат (DHAP). Тези 2 молекули са взаимно конвертируеми и двете могат да продължат по-нататък по пътя.
Фаза на изплащане: Този последен етап включва превръщането на GAP и DHAP в пируват, генерирайки ATP и NADH в процеса. Този етап се състои от няколко ензимни етапа, включително фосфорилиране на ниво субстрат и реакции на окисление. В крайна сметка се произвеждат 2 молекули пируват заедно с общо 4 молекули АТФ и 2 молекули NADH за всяка молекула глюкоза, която влиза в гликолизата.